CD4<sup>+</sup>CD25<sup>+</sup> Regulatory T Cell アイソレーションキット

CD4⁺CD25⁺ Regulatory T Cell アイソレーションキット

Description

CD4⁺CD25⁺ Regulatory T Cell Isolation Kitは、脾臓やリンパ組織の単細胞懸濁液から、マウスCD4⁺CD25⁺ 制御性T細胞を分離するために開発されました。分離は2ステップで行います。

Details

Background information
CD4⁺CD25⁺ 制御性T細胞は、in vivoやin vitroにおいて自己抗原や外来抗原に対する免疫反応を能動的に抑制することが示されています。IL-2Rα鎖であるCD25は、活性化CD4⁺ T細胞、CD8⁺ T細胞、樹状細胞およびB細胞にも発現しています。

Detailed separation procedure
分離は2ステップで行います。最初のステップでは、CD4⁺ 以外の細胞を、CD8 (Ly-2), CD11b (Mac-1), CD45R (B220), CD49b (DX5), Ter-119に対するビオチン標識抗体カクテルとAnti-Biotin MicroBeadsで間接的に磁気標識します。磁気標識された細胞をMACS^® Columnに通すことにより除きます。次のステップでは、フロースルー画分の濃縮されたCD4⁺ T細胞をCD25 MicroBeadsで標識し、CD4⁺CD25⁺ 制御性T細胞をポジティブセレクションします。

Downstream applications
CD4⁺CD25⁺ Regulatory T Cell Isolation Kitを用いてマウスリンパ節から分離された制御性T細胞は、in vitroでの免疫寛容誘導のためにDCを前処理する実験において、 DCと共培養するために使用されました¹。さらに、分離した制御性T細胞は、自己免疫性甲状腺疾患マウス実験モデル³などの種々の細胞移入実験にも用いられています²。黒色腫モデルマウス⁴への移入実験では、腫瘍免疫を阻害しました。また、in vtroでのsuppression assaysも分離した制御性T細胞を用いて行われています^5,6。

Columns

ステップ1の磁気分離（ディプリーション）: LD 又は autoMACS　Columns
ステップ2の磁気分離（ポジティブセレクション）: MS 又は autoMACS Columns

Figure 1

Isolation of CD4⁺CD25⁺ regulatory T cells from a mouse spleen cell suspension using the CD4⁺CD25⁺ Regulatory T Cell Isolation Kit, an LD and two MS Columns, a MidiMACS™ Separator, and a MiniMACS™Separator.

Spleen cells before separation

CD4⁺ T cells after depletion of non-CD4⁺ T cells

CD4<sup>+</sup> T cells after depletion of non-CD4<sup>+</sup> T cells

Isolated CD4⁺CD25⁺ regulatory T cells

Isolated CD4<sup>+</sup>CD25<sup>+</sup> regulatory T cells

Figure 2

Working scheme of the CD4⁺CD25⁺ Regulatory T Cell Isolation Kit.

CD4+CD25+ Regulatory T Cell アイソレーションキット

CD4⁺CD25⁺ Regulatory T Cell アイソレーションキット